NC膜、PVDF膜、尼龙转印膜的区别

详细说明：

NC膜（硝酸纤维素）

硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光（Luminol类）、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。

NC转移膜的使用简便，具有以下特点：

1.      无需甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟即可；

2.      NC膜易封闭，无需特别严谨的清洗条件；

3.      转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可稳定保存很长时间。实验证明：转移到NC膜上的几种蛋白4℃条件下保存5年依然保持免疫识别特性，依然可以得到清晰可信的Western Blot结果。

特别注意：纯的NC膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途——因为经不起多次“折磨”。

选择NC膜（硝酸纤维素)时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um，如果小于7KD建议选择0.1um膜。

专家建议选择纯的NC膜，混有含醋酸纤维（CM）的NC膜结合力会有所降低。由于NC膜上结合的蛋白会因一些去污剂而被代替，因此在封闭时最 好使用较温和的Tween20，且浓度不要超过0.3%（建议0.05%效果较佳）。

PVDF转印膜（聚偏二氟乙烯）

PVDF转印膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都优于NC膜（硝酸纤维素)（Pluskal,et al.,1986)。

PVDF膜结合量是100-200μg/cm²，高于市面主流的NC膜（结合量80-100μg/cm²），且结合强度PVDF比NC膜强6倍。在艾滋病毒（HIV）血清学检验中直接比较PVDF和NC膜，PVDF膜具有更好的截留总HIV抗原能力并提高抗体检测糖基化被膜抗原的性能。

更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择！

单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N-末端测序、蛋白消化/肽分离/内部测序和免疫检测（Kurien,et al.,2003)。特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者NC膜已经降解的情况下，PVDF膜依然保持本色。

此外，一些强疏水蛋白用PVDF膜效果会更好一些。PVDF膜适用的检测方法有化学发光、常规显色、同位素和标准染色都可以，不适用荧光。

特别注意：PVDF膜需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才可正常使用，而且使用过程中如果干了也要同样程序再处理。

PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，0.2um孔径对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比0.45um稍高。

尼龙转印膜（Nylon）

尼龙膜更多是用于核酸的转移，也有见于蛋白印迹，比如dot blot，尼龙膜结合力更强，结实，柔软且不易卷曲，机械强度大，便于操作，

但由于尼龙膜电荷密度高，使得非结合区的封闭比疏水性NC膜困难，对于灵敏度高的检测方法，背景问题尤为突出（据分子克隆III说通过热处理的酪蛋白和1%聚乙烯吡咯烷酮延长封闭时间可以改善），而且当转移缓冲液中存在有SDS时蛋白质容易从尼龙膜上泄漏（通过甲醛固定可缓解这一情况）。

另外尼龙膜目前市场尚未能直接染色，因此在许多情况下实验室人员进行WB实验不选择尼龙膜。

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